Respiration - méthode SituResp®
A10 - Méthode SituResp® extraite de Biofunctool
Résumé
La méthode SituResp® évalue l'activité biologique du sol par la libération de dioxyde de carbone à partir d'un échantillon de sol frais.
Question posée
Quelle est l'intensité de la vie microbienne du sol ?
Principe
La méthode SituResp est basée sur une incubation de 24 heures d'un échantillon de sol frais avec un gel coloré sensible au pH, rempli dans une macro-cuvette de spectrophotomètre. La couleur du gel change au cours du processus d'incubation en raison de la réaction du CO2 par le bicarbonate qu'il contient. Le changement de couleur du gel peut être mesuré avec un spectrophotomètre à 570 nm.
Références
Thoumazeau, A., Gay, F., Alonso, P., Suvannang, N., Phongjinda, A., Panklang, P., Chevallier, T., Bessou, C., Brauman, A., 2017. SituResp® : Une méthode rapide et rentable pour évaluer la respiration basale du sol sur le terrain. Applied Soil Ecology 121, 223-230.
Conditions de mise en œuvre
Portez des gants en nitrile et des lunettes de sécurité pendant les étapes de laboratoire. Ajoutez des gants thermiques lorsque vous manipulez les solutions chauffées.
Matériel et fourniture
Rouge de Cresol (C21H18O5S ; FW=382,43 g.mol-1 ; n° CAS : 1733-12-6)
Chlorure de potassium (KCl ; FW=74,55 g.mol-1 ; n° CAS : 7447-40-7)
Bicarbonate de sodium (NaHCO3 ; FW=84.00 g.mol-1 ; n° CAS : 144-55-8)
Chaux sodée ou hydroxyde de sodium (NaOH ; FW=40 g.mol-1 ; n° CAS : 1310-73-2)
Agar purifié pour la microbiologie (par exemple Sigma A1296 ; n° CAS : 9002-18-0)
Eau distillée
Macro-cuvettes en plastique de 4,5 ml pour spectrophotomètre optique (1 cm x 1 cm x 4,5 cm)
Plaque chauffante avec agitateur magnétique
Thermomètre
Balance de précision de laboratoire (0,0001 dec.)
Pipette de 1,5mL
Verrerie de laboratoire pour préparer la solution
Dessiccateur ou bocal hermétique de 1L
Réalisation de la mesure
a) Au laboratoire, une semaine avant l'expérience :
Préparation de la solution indicatrice (pour 1L )
En utilisant une balance de précision, pesez 16,77 g de KCl, 0,315 g de NaHCO3 et 0,0187 g de rouge Cresol
Mettre dans une fiole jaugée de 1L et remplir jusqu'à 1L avec de l'eau distillée
(Utilisez cette solution immédiatement ou conservez-la au maximum 2 mois à 4°C)
Préparation du gel (pour 100 cuvettes)
À l'aide d'une plaque chauffante munie d'un agitateur magnétique, chauffer et agiter 1,5 g d'agar purifié dans 50 ml de solution aqueuse jusqu'à ébullition complète.
(la solution doit atteindre au moins 90°C, l'agar doit être complètement en fusion)
Diluer la solution d'agar avec 100 ml de la solution d'indicateur et maintenir la solution à 60-65°C
Remplissez les cuvettes en plastique du spectrophotomètre avec 1,5 ml de solution de gel à 60-65°C
Laisser refroidir la cuvette à température ambiante pendant environ 2h sur un banc
Conservez la cuvette dans un dessiccateur à l'obscurité et à température ambiante avec un excès de chaux sodée (ou 200mL 1M NaOH) et de l'eau pendant une semaine. La couleur du gel doit passer du rouge au violet.
b) Sur le terrain :
Recueillir environ 150 g de terre à l'aide d'une truelle ou d'un cylindre d'échantillonnage du sol
Tamiser la terre à 5 mm
Mettre 100g de terre tamisée dans le bocal
Faire le blanc du spectrophotomètre avec une cuvette d'eau distillée
Lire l'absorbance (AbsT0) d'une cuvette à 570 nm
(une fois retirée du dessiccateur, la cuvette doit être lue immédiatement)
Après la lecture de l'AT0, protégez la surface de lecture de la cuvette avec un mouchoir en papier, du papier ou insérez-la dans un petit bocal ouvert.
Mettez immédiatement la cuvette dans le bocal hermétique et fermez le bocal
Conservez le bocal 24h à température ambiante.
Après 24h, lire l'absorbance (AbsT24) de la cuvette avec le spectrophotomètre à 570 nm.
Expression des résultats
Dernière mise à jour