# Procédures

### Préparation des solutions de saturation

Afin de charger les membranes il faut préparer 1 litres de solution par lot d’environ 30 membranes :

·       <mark style="color:green;">**Membranes anioniques. Pour 1 litre de solution de NaHCO3 à 0.5M :**</mark>

\-          Dissoudre le NaHCO3 (pot de 42 g) dans une bouteille de 1L à col large avec environ 800ml d’eau distillée (attention à ne pas mettre plus de 1L d’eau !). &#x20;

\-         Ajuster à 1L avec de l’eau déminéralisée jusqu’au trait de jauge à l'aide de la pissette.

**·      &#x20;**<mark style="color:green;">**Membranes cationiques. Pour 1 litre de solution de NaCl à 0.5M :**</mark>

\-          Dissoudre le NaHCO3 (pot de 29.22g) dans une bouteille de 1L à col large avec environ 800ml d’eau distillée (attention à ne pas mettre plus de 1L d’eau !). &#x20;

\-         Ajuster à 1L avec de l’eau déminéralisée jusqu’au trait de jauge à l'aide de la pissette.

### Chargement des membranes avec les solutions de saturation (minimum 24h) <a href="#toc134632795" id="toc134632795"></a>

Manipulez les membranes découpées avec des gants, et à l’aide d’une aiguille transpercer le bout de la membrane et y insérer un fil de pêche d’environ 40/50cm de longueur.

Mettre les membranes préparées (environ 30/L) avec le fil dans les solutions de saturation :

\-          NaHCO3 pour les membranes anioniques (-)

\-          NaCl pour les membranes cationiques (+)

{% hint style="success" %}
Laisser les membranes au minimum 24h dans leur solution respective et au frais.
{% endhint %}

### Mise en place des membranes sur la zone d’échantillonnage

Pour vous rendre sur le terrain, garder si possible les membranes au frais dans une glacière avec des pains de glace (éviter le contact pain de glace-membrane). Utiliser des gants lors de la manipulation.

Éventuellement et pour faciliter les manipulations, mettre chaque membrane dans des sachets zip (60x120mm) individualisés avec un peu d’eau distillée (ou de solution de saturation) afin d’éviter que la membrane s’assèche, et étiqueter pour identifier la station.

Creuser un trou jusqu’à 8 cm de profondeur en veillant à perturber le moins possible le sol que l’on va replacer au-dessus de la membrane. Placer une membrane horizontalement dans le trou à l’aide d’une pince. Les membranes anioniques et cationiques doivent être proche, environ 10cm l’une de l’autre, sans jamais se chevaucher.

Reboucher le trou doucement en veillant à perturber le moins possible le sol. Puis attacher le fil de pêche (relier à la membrane) à un piquet en surface.

{% hint style="warning" %}
Veiller à ne pas tirer sur le fil de pêche pour ne pas briser la membrane.

Pour faciliter le repérage, la membrane anionique peut être relié à un piqué de couleur différente de celui relié à la membrane cationique.

Si la zone d’échantillonnage est très sèche, humidifier avec de l’eau déminéralisée. La quantité apportée doit être strictement la même sur chaque membrane et chaque point d’échantillonnage. Veillez aussi à utiliser un cylindre pour standardiser la surface de contact du volume d’eau distillée apporté.
{% endhint %}



{% hint style="danger" %}
Attention au piétinement et au passage des engins agricoles. Attention également au développement de la végétation qui peut masquer les jalons. Dans l'idéal géoréférencez le point avec un [GNSS RTK](https://docs.centipede.fr/) avec une précision centimétrique.
{% endhint %}

<mark style="color:orange;">**Laisser les membranes au champ pendant au minimum une semaine. Noter la pluviométrie ainsi que le temps d’incubation.**</mark>

{% hint style="success" %}
Le temps total d’incubation est variable d’une zone climatique à une autre. La pluviométrie est un facteur important à prendre en compte. Plus le sol est humide et la pluviométrie importante, plus l’incubation peut être courte. Au contraire, si le sol est sec pendant la période d’incubation, il est conseillé d’arroser à l’eau distillée avec un même volume et avec un cylindre, chaque membrane. L’intensité et la fréquence de l’arrosage doit être adapté selon les contextes pédoclimatiques.
{% endhint %}

### Récupérer les membranes dans le sol <a href="#toc134632798" id="toc134632798"></a>

Récupérer une membrane dans le sol en suivant le fil de pêche (sans le tirer), éviter le plus possible de perturber la membrane. Enlever le plus de particules de sol possible en secouant délicatement la membrane et brossant délicatement la membrane avec un pinceau ou une brosse à dent.

Couper le fils de pêche avec des ciseaux puis mettre la membrane dans un Falcon contenant 35 ml de solution d’extraction (KCl 1M). &#x20;

Bien refermer et noter le nom de la station, le type de membrane (+ ou -) et la date de retrait.

{% hint style="danger" %}
Si la membrane est détériorée ou coupée, mesurer sa taille et ajuster le calcul des résultats en conséquence.
{% endhint %}

### Préparation de la solution d’extraction (KCl 1M) <a href="#toc134632798" id="toc134632798"></a>

La solution d’extraction est la même pour les membranes anioniques et cationiques.

Pour 1 litre de solution de KCl à 1M :

\-          Dissoudre  74.55g de KCl  avec de l'eau déminéralisée dans la fiole jaugée de 1L.

\-          Ajuster jusqu’au trait de jauge.

### Extraction des ions en laboratoire <a href="#toc134632800" id="toc134632800"></a>

Agiter les tubes avec un agitateur durant 16h à 100 rpm à 30°C. S’il n’est pas possible d’utiliser un agitateur, on peut réaliser l’agitation à la main durant 5min / membrane, en respectant le même rythme d’agitation : 1 mouvement par seconde.

Prélever environ 8-9 ml de solution avec une seringue propre.

Disposer un filtre PES 0.2 µm et l’aiguille sur la seringue.

Percer le septum d’une vacuette 9ml sous vide et injecter le contenu à travers le filtre.

Les vacuettes sont marquées d’une jauge à 9 ml, veiller à ne pas la dépasser pour ne pas mettre sous pression positive l’intérieur de la vacuette et voir s’envoler le bouchon (surtout si les échantillons son congelés).

Conserver ces solutions à l’abri de la lumière et au frais (réfrigérateur, 4°C) jusqu’à l’analyse.

### Dosage des ions <a href="#toc134632801" id="toc134632801"></a>

Analyser en laboratoire les anions et cations ciblés dans la solution . Classiquement nitrate et ammonium (NO3- et NH4+ respectivement).
